慢病毒载体构建和病毒包装

   发布日期:2023-07-25 01:01:52     来源:网络整理    作者:本站编辑    浏览:125    评论:0    

一. 慢病毒包装

慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1作为基础发展起来的基因治疗载体,具有能稳定表达外源基因、感染谱广泛、有效感染处于分裂期和静止期的细胞等优点,成为导入外源基因的有效工具。慢病毒已被广泛应用到各种细胞系基因过表达或RNA 干扰。这是通过修改病毒载体的构建来实现的。

应用

  1. 基因过表达:为了过表达某个目标基因,可以将这个基因克隆到慢病毒载体中。当目标细胞被这种病毒感染后,该基因将被转录和翻译,导致其蛋白的过表达。

  2. RNA 干扰(RNA interference,RNAi):慢病毒也可以用于基因沉默,最常用的方法是通过小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)。将目标基因的特定shRNA序列克隆到慢病毒载体中,然后将这个构建用于感染目标细胞。shRNA会在细胞内被处理成siRNA,这种siRNA会导致RNA诱导的沉默复合体(RISC)的形成,从而特异性地沉默目标基因。

二、慢病毒包装与质量检测

芙禾生物采用第四代质粒系统,也是四质粒系统,这也是目前被广泛使用的慢病毒载体系统。

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