非洲猪瘟疫苗研发的通常流程和主要困难
非洲猪瘟疫苗开发的通常流程如下(以减毒活疫苗的研发为例腺病毒包装技术,图片来源于网络):
非洲猪瘟疫苗研发主要困难(雷建林等2019):
1、遗传多样性:目前,依据p72基因(B646L)末端核苷酸的变化,可将ASFV分为24个基因型,基于病毒是否会导致红细胞吸收的特点,已鉴定出大约有8个血清群。2、免疫保护措施不知道。3、结构复杂,基因组巨大为170-190kb,功能性蛋白达到两百个。4、可选取的入侵形式:ASFV可借助受体介导的内吞作用或非特异性的巨胞饮作用入侵靶细胞。5、免疫逃避:ASFV主要靶向单核-巨噬细胞系统,通过促进细胞增殖、宿主免疫应答等策略逃逸宿主免疫攻击系统。6、疫苗研发遭遇的其他问题:基因缺乏疫苗被觉得是短期内最有期望开发成功的疫苗,具有同源保护功效,也能抵御异源毒株的防御,但存在安全隐患,进一步鉴定及敲除毒力基因后具备很高应用前景似乎,该类疫苗在商业化的进程也遭受各种挑战:
1)需建立区别疫苗免疫与野毒传染的(from,DIVA)诊断方法;
2)需推进病毒稳定表达的细胞系,原代单核-巨噬细胞仅限于试验室对ASFV生物特征与免疫原性的研究,不适宜用于疫苗批量制造,其它易感细胞传代后细菌容易变异;
3)需建设安全的病毒操作系统,ASFV致病性、攻毒模型、免疫效力评价需在动物生物安全三级(ABSL3)以上实验室进行;
4)安全性及免疫原性评价周期较长,基因缺乏疫苗专利申请及兽药证书的审批需要严格检测程序,确保毒株在宿主及环境中安全、遗传稳定,且免疫效力不受妨碍。
十一种在研非洲猪瘟疫苗的比较
01
类型:减毒活疫苗
构建策略:-505R缺失和CD2v与-505R联合缺失基因型:Ⅱ,我国毒株:Pig/CN/HLJ/2018构建单位:中国林业科大学哈尔滨兽医研究所效果:能提供对欧洲猪瘟中国流行强毒株的100%免疫保护,可成为安全和有效的防治中国非洲猪瘟疫情的疫苗,具有极大的社会价值。研究阶段:截至8月,临床中试
02
类型:减毒活疫苗
构建策略:CD2v和MGF基因
基因型:Ⅱ,我国
毒株:SY18构建单位:军事科大学军事医学研究院军事兽医研究所效果:接种猪能够100%抵抗亲本毒株SY18株的攻击
研究阶段:安全有效评价
03
类型:亚单位疫苗
构建策略:2018年分离的沈阳毒株CD2v蛋白出发,经剪切优化后,用CHO细胞表达系统表达了重组CD2v蛋白。
基因型:Ⅱ,我国毒株:SY18构建单位:青岛易邦生物项目有限公司效果:本发明的表达非洲猪瘟CD2v蛋白细胞株,表达量高容易制备,可用于区分诊断,为制造非洲猪瘟亚单位疫苗和治疗试剂奠定了稳固的基础。研究阶段:构建完成,具体不详
04
类型:亚单位疫苗
构建策略:在SF9细胞中表达非洲猪瘟CD2v蛋白的重组杆状病毒
基因型:Ⅱ,我国
毒株:SY18构建单位:青岛易邦生物项目有限公司效果:本发明的表达非洲猪瘟CD2v蛋白细胞株,表达量高容易制备,可用于区分诊断,为制造非洲猪瘟亚单位疫苗和治疗试剂奠定了稳固的基础。研究阶段:构建完成,具体不详
05
类型:减毒活疫苗构建策略:通过不同的自噬质粒构建不同的失衡突变体,和在COS7细胞系,以及在PAM细胞系。基因型:I,西班牙
毒株:NH/P68
构建单位:CSIC-UAM
效果:不同的失衡突变体对Arm07毒株有一定程度的保护功效,能够降低临床病症的程度研究阶段:安全有效评价
06
类型:减毒活疫苗
构建策略:基因的单核苷酸缺乏导致ORF移码,提前产生终止密码子
基因型:Ⅱ,西班牙毒株:Lv17/WB/Rie1构建单位:马德里动物健康研究中心;马德里康普顿斯学院效果:口服使用,对野猪Arm07毒株的传染的防治保护力为92%研究阶段:安全有效评价
07
类型:减毒活疫苗
构建策略:缺失特异性毒性相关的9GL(B119L)和UK(DP9696R)基因
基因型:Ⅱ,美国
毒株:2007
构建单位:美国农业部
效果:在体内,甚至在非常高的剂量下()对猪肌内施用ASFV-GΔ9GL/ΔUK也不会诱导疾病。重要的是,在感染28天后使用毒性的菌株毒株2007攻击时,使用104或感染的动物稳定地得到保护而免于临床病症的体现。
研究阶段:安全有效评价
08
类型:减毒活疫苗
构建策略:缺失:多基因家族360基因9L,10L,11L,12L,13L和14L;和多基因家族505基因1R,2R,3R和4R。缺失基因基因型:Ⅱ腺病毒包装技术,英国
毒株:/3是来自葡萄牙的ASFV的非致病性分离株形成单位:皮尔布莱特研究所
效果:本发明人终于看到,与肌内给药相比,鼻内施用减毒的ASF病毒在较低的剂量下是有效的。疫苗可以在初免-推动方案后施用。例如,在第一次接种后,受试者可以在一段时间(比如约7,14,21或28天)期间接受第二次提高施用。通常,加强施用的剂量大于初免施用的剂量。
研究阶段:安全有效评价
09
类型:减毒活疫苗
构建策略:不详
基因型:Ⅱ,越南
毒株:不详
构建单位:越南国立农业大学
效果:在实验室和中国北部的三个农场使用效果良好研究阶段:安全有效评价
10
类型:核酸疫苗
推进策略:将重组K205R-IRES-A104R-IRES-E183L基因连接至pMD19-T载体,将胚乳质粒转化感受态细胞,扩增后提取质粒即克隆质粒,在克隆质粒中提取目的片段;将目的片段进行体外转录即得mRNA。基因型:不详,我国
毒株:不详
构建单位:四川农业学校效果:不详研究阶段:完成了建立,后续工作不详
11
类型:重组腺病毒构建策略:非洲猪瘟与P54基因共表达的重组腺病毒载体打造及腺病毒包装基因型:不详,我国
毒株:不详
构建单位:扬州大学效果:不详
研究阶段:完成了建立,后续工作不详
以上都为从公开资讯获取的材料,图片来源于源文件,不包括其他在研但未发布的内容。
针对是否使用商业化的疫苗目前在我国业界一直存在一定的争议,同时针对临床上流行的各类所谓的“疫苗”大家应该擦亮眼睛,避免上当受骗遭受双重代价,目前尚无任何一种非洲猪瘟疫苗商业化,即使到时有商业化的疫苗,对于不同的所谓的“疫苗”毒株,以及不同种类的野毒株之间都必须进行区分诊断,选择对于性的方式,避免不必要的代价。